怎么处理细胞系培养出现的污染?

细胞系培养中常见的生物污染包括细菌污染、霉菌污染、支原体污染、黑点污染、真菌污染和原生动物污染。这些污染在细胞培养中的特点及相应的解决办法如下：
 

细菌污染
细菌在普通倒置显微镜下呈黑色和细砂状。根据感染菌的种类不同，可能会呈现不同的形状，培养液一般会变得浑浊、黄色，对细胞生长有明显影响。
解决方法：仔细检查器具的灭菌情况，确保通风时间和高压灭菌器的压力是否足够。重要的是，与培养基接触的移液管等物品如果被污染两次，则可能会导致储存溶液也受到污染。所以一定要注意！下次使用前要检查培养基的浑浊度。此外，建议在培养基中添加抗生素。
 
支原体污染
支原体是隐蔽的污染物，不能通过过滤去除。显微镜下没有任何可见的支原体污染迹象，比如细胞病变和浊度或 pH 值变化（即使在严重污染的培养基中），这样就会导致我们产生错误的安全感。而在牛血清中，支原体是最常见的微生物之一。
解决方法：通常的过滤灭菌方法对支原体没有影响。细胞一旦被支原体污染，特别是对重要的细胞系，必须去除支原体，一般的方法有抗生素治疗、抗血清治疗和抗血清与补体联合治疗。值得注意的是，支原体突出的结构特征是没有细胞壁。因此，它对作用于细胞壁的生物合成抗生素（如 β-内酰胺类、万古霉素等）完-全不敏感，并且通常对多粘菌素、利福平和磺胺类药物具有耐药性。相反，四环素类和大环内酯类抗生素对支原体的抑制作用最-强，而氨基糖苷类和氯霉素的抑制作用较弱。
 
黑点污染
黑色的游动点能穿透滤膜并在空气中扩散。它们在低倍镜下显示为黑色圆点，在高倍镜下显示为可移动的黑色斑点。培养液也不浑浊，一般影响较小，因此细胞仍可使用。通常，黑点污染后，细胞生长良好，运动物体无明显增加，培养基的颜色和透明度无明显变化。在同一批血清培养的细胞中也可以发现类似的现象。
解决方法：黑点对细胞生长状态没有明显影响，细胞增殖后会自然消失，因此除了血清置换外，无需特殊处理。细胞系如果细胞可能被小的运动点污染，建议增加培养皿细胞密度，以提高细胞存活率。
 
真菌污染
真菌污染后，培养基一般清澈，保持原色。细丝可以在显微镜下观察到。一些真菌类似于死细胞碎片，但其中许多清晰可见，看起来像珊瑚，比较容易区分。此外，它们会慢慢长出细细的黑色细丝，因为它们生长得比较慢，不像细菌那样容易被发现，一旦发现培养基被污染，它们将很难存活。
解决方法：一旦被真菌污染，果断丢弃，然后对细胞房、CO2 培养箱、器皿和培养基进行彻-底消毒。
 
原生动物污染
原生动物污染后，细胞培养基变得轻微浑浊。在显微镜下，大量的小点来回移动。细胞系虽然此时细胞仍能生长，但繁殖速度减慢，细胞生长状态不好，边缘不清，变得不透明。原生动物与细胞形成共生关系。同时，原生动物与细胞竞争营养。这种共生现象非常普遍，但以细胞为主，因为原生动物的数量相对较少，因而对细胞的正常生长没有影响，只有当它们达到一定数量时，才爆发成为恶性循环。
 
解决方法：原生动物污染的原因有很多，如液体消毒问题、操作问题、环境问题等，如果细胞足够，果断丢弃被污染的细胞和复苏细胞。如果要保留，需要购买使用相关的灭菌试剂。