金狮贵宾服务生物的常用方法及原理免费代测

主营产品：

天津金狮贵宾服务生物Elisa试剂盒系列：

ELISA试剂盒在国内有许多种叫法，例如：ELISA检测试剂盒、ELISA Kit、酶联免疫试剂盒、酶联免疫吸附测定试剂盒、酶联免疫分析试剂盒、酶免试剂盒等，比较常见的叫法是ELISA检测试剂盒、酶联免疫吸附测定试剂盒等。

ELISA试剂盒自从60-70年代问世以来，得到科研工作者的认可及推崇，在欧美及中国获得很大的推广，尤其是国内生化领域的长足发展。

Elisa生物试验是一种敏感性高，特异性强，重复性好的实验诊断方法。由于其试剂稳定、易保存，操作简便，结果判断较客观等因素，已广泛应用在免疫学检验的各领域中。

可检测种属

（人，小鼠，大鼠，植物，鱼，虾，蟹，牛，羊，狗，猫，微生物，细胞，土壤等动植物）

可以检测样为

（血清，血浆，唾液，尿液，组织，细胞上清，裂解液等）

产品检测目的：

样本水平表达（定量检测，定性检测，酶活性检测）

规格：96T 可以检测89个样  48T可以检测41个样

备注：6个标准一个空白对照

有效期：6个月 保存2-8°C

elisa试剂盒的优点：

一、高效、灵敏、特异的抗体；

二、稳定的重复性和可靠性；

三、吸附性能好，空白值低，孔底透明度高的固相载体；

四、适用血清、血浆、组织匀浆液、细胞培养上清液、尿液等等多种标本类型；

五、最大限度的节省实验经费。

常用方法及原理如下：

1. 夹心法：

夹心法常用于检测大分子抗原，一般的操作步骤为:

a. 将具有专一性的抗体固著（coating）于塑胶孔盘上，完成后洗去多余抗体

b. 加入待测检体，检体中若含有待测的抗原，则其会与塑胶孔盘上的抗体进行专一性键结

c. 洗去多余待测检体，加入另一种对抗原专一的一次抗体，与待测抗原进行键结

d. 洗去多余未键结一次抗体，加入带有酶的二次抗体，与一次抗体键结

e. 洗去多余未键结二次抗体，加入酶底物使酵素呈色，以肉眼或仪器读取呈色结果

原理：针对抗原分子上2个不同抗原决定簇的单克隆抗体分别作为固相抗体和酶标抗体，将大分子抗原分别制备固相抗原和酶标抗原结合物。

2. 间接法

间接法常用于检测抗体，一般的操作步骤为：

a. 将已知的抗原固著于塑胶孔盘上，完成后洗去多余的抗原。

b. 加入待测检体，检体中若含有待测的一次抗体，则其会与塑胶孔盘上的抗原进行专一性键结。

c. 洗去多余待测检体，加入带有酶的二次抗体，与待测的一次抗体键结。

d. 洗去多余未键结二次抗体，加入酶底物使酶呈色，藉仪器（ELISA reader）测定塑胶盘中的吸光值（OD值），以评估有色终产物的含量即可测量待测抗体的含量。

原理：利用酶标记的抗抗体以检测已与固相结合的受检抗体。

3. 竞争法

竞争法是一种较少用到的ELISA检测机制，一般用于检测小分子抗原，天津金狮贵宾服务生物其操作步骤为：

a. 将具有专一性的抗体固著于塑胶孔盘上，完成后洗去多余抗体

b. 加入待测检体，使检体中的待测抗原与塑胶孔盘上的抗体进行专一性键结

c. 加入带有酶的抗原，此抗原也可与塑胶孔盘上的抗体进行专一性键结，由于塑胶孔盘上固著的抗体数量有限，因此当检体中抗原的量越多，则带有酶的抗原可键结的固著抗体就越少，亦即，两种抗原皆竞相与塑胶孔盘上抗体键结，即所谓竞争法之由来。

d. 洗去检体与带有酶的抗原，加入酶底物使酶呈色，当检体中抗原量越多，代表塑胶孔盘内留下之带有酶的抗原越少，显色也就越浅。

e. 当需要侦测无法获得两种以上单一性抗体的抗原，或是不易得到足够的纯化抗体以固著于孔盘上时，一般会考虑使用竞争法ELISA。

原理：将特异性抗体包被于固相载体表面，经洗涤后分成两组：一组加酶标记抗原和被测抗原的混合液，另一组只加酶标记抗原，经孵育洗涤后加底物显色，这两组底物降解量之差，即为所要测定的未知抗原的量。

天津金狮贵宾服务生物免费代测服务

天津金狮贵宾服务生物"始终以"提供好的质量给客户，为客户的利益服务"为理念。拓展顶尖的产品研发与经验丰富的技术团队，致力于创新产品的研发。目前，实验室占地约800平米，内设先进实验仪器设备，能够完成ELISA检测、PCR扩增、免疫学检测等各类生物学实验。天津金狮贵宾服务生物经过10年ELISA试剂盒技术的积累与沉淀，不断创新突破，努力将中国生命科学研究提升到全新的高度！

凡购买本公司目录任何一种酶联免疫检测试剂盒，您只需将需要检测的动物（Human, Rat, Mouse, Rabbit, Monkey, Pig……）种类和检测指标（白介素类、激素类）及标本数量（48T/96T）通知公司业务员即可。

免费代测服务样本要求：
在收集标本前都必须有一个完整的计划，必须清楚要检测的成份是否足够稳定。我们提倡新鲜标本尽早检测，对收集后当天就进行检测的标本，及时储存在4℃备用，如有特殊原因需要周期收集标本，请造模取材后，将标本及时分装后放在-20℃或-70℃条件下保存。因冰室与室温存在一定温差，蛋白极易降解，直接影响实验质量，所以避免反复冻融。代测放免标本的客户取材前须向我司销售人员索要说明书，具体操作注意事项请与我司技术人员沟通。

免费代测服务液体类标本：标本必须为液体，不含沉淀。包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清、组织匀浆等。

血 清： 室温血液自然凝固10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。收集上清。如有沉淀形成，应再次离心。

血 浆： 应根据试剂盒的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，加入10%（v/v）抗凝剂(0.1M柠檬酸钠或1%heparin 或2.0%EDTA.Na2)混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。如有沉淀形成，应再次离心。

尿液、胸腹水、脑脊液：用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。如有沉淀形成，应再次离心。

细胞培养上清： 检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.0-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

组织标本： 切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，缓冲液中可加入1μg/L蛋白酶抑制剂或50U/ml的Aprotinin。用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清置于-20度或-70度保存，如有必要，可以将样品浓缩干燥。分装后一份待检测，其余冷冻备用。

天津金狮贵宾服务生物标本时需注明以下情况：
1、标本编号
2、所测项目
3、是否做复孔
4、实验后标本是否寄回