elisa试剂盒如何操作
2023-04-07
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标本要求：
1.标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。
2.不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
2.不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
elisa试剂盒操作步骤：
32ng/mL | 5号标准品 | 150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液 |
16ng/mL | 4号标准品 | 150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液 |
8ng/mL | 3号标准品 | 150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液 |
4ng/mL | 2号标准品 | 150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液 |
2ng/mL | 1号标准品 | 150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液 |
2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用。
5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7.温育：操作同3。
8.洗涤：操作同5。
9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10分钟。
10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11. 测定：以空白孔调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止液后15分钟以内进行。
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